賽默飛色譜及質(zhì)譜
【藥典】生物藥-基于高分辨質(zhì)譜、HCD 和 EThcD 碎裂的重度脂肪酸鏈修飾多肽解析
檢測樣品:重度脂肪酸鏈
檢測項目:多肽修飾
方案概述:在一些文獻中,單脂肪酸鏈的修飾分析已經(jīng)做了介紹 [1],本文以某膜蛋白為例,講解蛋白的油脂 + 單脂肪鏈混合修飾解析。
治療和預(yù)防性重組蛋白藥物通常具有豐富的修飾,例如糖基 化、磷酸化 / 硫酸化、酰胺化、乙?;椭|(zhì)修飾。在這些修 飾中,脂質(zhì)修飾的分析尤其困難。脂質(zhì)修飾的蛋白以膜蛋白 為主,從單脂肪鏈修飾到甘油脂修飾都用于了生物藥的研發(fā)。 其中,甘油脂 + 單脂肪鏈混合修飾的蛋白的表征非常困難。 一,脂修飾的蛋白,酶解得到的脂肽通常疏水性較強,從 而導(dǎo)致非常顯著的色譜殘留,為不同樣品的分析帶來挑戰(zhàn)。 二,該脂質(zhì)修飾的多肽分子量較大,較大分子量的碎裂是 對質(zhì)譜碎裂模式的挑戰(zhàn)。三,如何歸屬脂肽碎裂得到的碎片, 用于推導(dǎo)脂質(zhì)修飾的結(jié)構(gòu)。
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