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PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒產品說明書(簡版）

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主要用途

 

 PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結合而產生熒光信號來精確定量樣品中DNA含量的經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，高度敏感。

 

技術背景

 

作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結合，產生熒光信號。PicoGreen技術可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復性標準差異（Standard Deviation）低，不受樣品化學成分的干擾。

 

產品內容

 

染色液（Reagent A）                      62.5微升

稀釋液（Reagent B）                       15 毫升

標準液（Reagent C）                            1毫升

產品說明書                                 1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent A）和標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析

 

實驗步驟

 

一、 測定準備

 

1． 準備好待測樣品，置于冰槽里

2． 設定好熒光分光光度儀（溫度為37℃）：激發(fā)波長480nm，散發(fā)波長530nm，并置零 

3． 實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀釋液（Reagent B）到新的15毫升離心管，加入25微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。

 

二、 構建標準曲線

 

1． 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管

2． 分別加入500微升稀釋液（Reagent B）到每個離心管

3． 移取500微升標準液（Reagent C）到1號管，混勻

4． 小心移取500微升1號管稀釋的標準液（Reagent C）到2號管，混勻

5． 小心移取500微升2號管稀釋的標準液（Reagent C）到3號管，混勻

6． 小心移取500微升3號管稀釋的標準液（Reagent C）到4號管，混勻

7． 將1至5號管放進冰槽里備用；標準管含量見下表