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PCR測(cè)試盒技術(shù) 熒光探針和熒光染料及其原理
閱讀：2179 發(fā)布時(shí)間：2013-8-4 PCR測(cè)試盒 熒光探針和熒光染料及其原理2
1、 PCR測(cè)試盒原理技術(shù) 熒光探針和熒光染料及其原理分子信標(biāo)
分子信標(biāo)是一種在靶 DNA 不存在時(shí)構(gòu)成莖環(huán)布局的雙符號(hào)寡核苷酸探針。在此發(fā)夾結(jié)構(gòu)中，位于分子一端的熒光基團(tuán)與分子另一端的淬滅基團(tuán)緊緊接近。在此結(jié)構(gòu)中，熒光基團(tuán)被激起后不是發(fā)生光子，而是將能量傳遞給淬滅劑，這一進(jìn)程稱為熒光諧振能量傳遞（ FRET ）。因?yàn)?" 黑色 " 淬滅劑的存在，由熒光基團(tuán)發(fā)生的能量以紅外而不是可見光方式開釋出來。若是第二個(gè)熒光基團(tuán)是淬滅劑，其開釋能量的波長(zhǎng)與熒光基團(tuán)的性質(zhì)有關(guān)。分子信標(biāo)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)中，環(huán)通常為 15-30 個(gè)核苷酸長(zhǎng)，并與目標(biāo)序列互補(bǔ)；莖通常 5-7 個(gè)核苷酸長(zhǎng)，并彼此配對(duì)構(gòu)成莖的結(jié)構(gòu)。熒光基團(tuán)銜接在莖臂的一端，而淬滅劑則銜接于另一端。分子信標(biāo)有必要十分非常的設(shè)計(jì)，以致于在復(fù)性溫度下，模板不存在時(shí)構(gòu)成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，模板存在時(shí)則與模板匹配。與模板配對(duì)后，分子信標(biāo)的構(gòu)象改動(dòng)使得熒光基團(tuán)與淬滅隔開。當(dāng)熒光基團(tuán)被激起時(shí)，它發(fā)出自身波長(zhǎng)的光子。
2、PCR測(cè)試盒原理技術(shù)熒光探針和熒光染料及其原理TaqMan 探針
TaqMan 探針是多人具有的技術(shù)。 TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增有關(guān)。它設(shè)計(jì)為與目標(biāo)序列上游引物和下流引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的 5’ 尾端，而淬滅劑則在 3’ 結(jié)尾端。當(dāng)完好的探針與目標(biāo)配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與 3’ 端的淬滅劑靠近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的 5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。 TaqMan 探針適合于各種耐熱的聚合酶，如 DyNAzymeTM II DNA 聚合酶。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增多，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷堆集。因而熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)品的數(shù)量呈正比關(guān)系。