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細(xì)胞

原代細(xì)胞

細(xì)胞系

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大額牛肺細(xì)胞（BFR-L1）源自新生雄性大額牛肺組織，由中科院昆明細(xì)胞庫于2000年建立。呈成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長，常用M-199培養(yǎng)基加15%胎牛血清培養(yǎng)，用于相關(guān)科學(xué)研究。

詳細(xì)介紹

大額牛肺細(xì)胞

大額牛肺細(xì)胞源于健康大額牛肺組織，選取肺實(shí)質(zhì)正常區(qū)域，經(jīng)yi酶-膠原酶聯(lián)合酶解、梯度離心純化、貼壁篩選及傳代培養(yǎng)獲得，嚴(yán)格遵循原代細(xì)胞分離及細(xì)胞系建立的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，全程嚴(yán)格控制無菌環(huán)境，確保細(xì)胞無外源污染，同時(shí)最da程度保留該細(xì)胞的固有生物學(xué)特性。該細(xì)胞系經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)量檢測，細(xì)胞純度≥98%，通過免疫熒光染色鑒定，特異性表達(dá)肺細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物（如SP-A、SP-B等肺泡表面活性物質(zhì)結(jié)合蛋白），不表達(dá)雜細(xì)胞標(biāo)志物，確保細(xì)胞的特異性與純度；支原體、細(xì)菌、真菌及雜細(xì)胞檢測均為陰性，無外源病毒污染，符合細(xì)胞庫基本質(zhì)量要求，可直接用于各類大額牛相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。該細(xì)胞為典型貼壁生長細(xì)胞，在適宜培養(yǎng)條件下呈多邊形或梭形，胞體舒展，排列均勻，傳代過程中可穩(wěn)定保持肺細(xì)胞的生理功能及生長特性，可精準(zhǔn)模擬大額牛肺組織的體內(nèi)生理狀態(tài)，為大額牛肺相關(guān)研究提供穩(wěn)定、可靠的細(xì)胞來源，同時(shí)為大額牛種質(zhì)資源的體外保存提供技術(shù)支撐。

細(xì)胞核心特性

該細(xì)胞既具備牛肺細(xì)胞的固有生物學(xué)特性，又兼具大額牛te有的物種專屬優(yōu)勢，核心特性突出，適配科研及相關(guān)應(yīng)用需求：一是物種特異性強(qiáng)，分離自珍xi大額牛肺組織，保留大額牛te有的遺傳特征及生理特性，其分子水平與普通牛肺細(xì)胞存在差異，可用于大額牛與其他牛屬物種的比較生物學(xué)研究，助力大額牛分子系統(tǒng)發(fā)生研究及種質(zhì)資源保護(hù)；二是功能完整，可正常分泌肺表面活性物質(zhì)（PS）及肺泡表面活性物質(zhì)結(jié)合蛋白（SP），參與肺表面張力調(diào)節(jié)、肺泡穩(wěn)定性維持及肺損傷防御，同時(shí)具備一定的氧代謝調(diào)節(jié)能力，貼合牛肺細(xì)胞的固有生理功能，可用于肺功能相關(guān)機(jī)制研究；三是生長特性良好，呈貼壁生長，貼壁率≥95%，無需額外添加基質(zhì)包被即可穩(wěn)定貼壁，增殖能力較強(qiáng)，倍增時(shí)間約48-72小時(shí)，可穩(wěn)定傳代8-10代，形態(tài)均一，無明顯衰老或凋亡現(xiàn)象，批間差異小，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性；四是培養(yǎng)便捷，適配常規(guī)原代肺細(xì)胞培養(yǎng)條件，無需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備，普通實(shí)驗(yàn)室即可完成培養(yǎng)、傳代及凍存操作，細(xì)胞對(duì)營養(yǎng)條件要求溫和，適配常規(guī)DMEM高糖培養(yǎng)體系，可根據(jù)需求選用合適的培養(yǎng)基類型，降低實(shí)驗(yàn)門檻；五是質(zhì)量可控，每批細(xì)胞均提供完整的質(zhì)量檢測報(bào)告，包含細(xì)胞純度、活性、污染檢測及特異性標(biāo)志物鑒定等內(nèi)容，同時(shí)可提供細(xì)胞遺傳特征相關(guān)數(shù)據(jù)，滿足科研實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量要求，適配細(xì)胞及種質(zhì)資源相關(guān)資料建檔保存需求；六是應(yīng)用廣泛，可適配多種實(shí)驗(yàn)場景，既用于大額牛相關(guān)研究，也可拓展應(yīng)用于肺損傷修復(fù)、肺表面活性物質(zhì)相關(guān)研究及生物醫(yī)藥領(lǐng)域的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用場景多元。

細(xì)胞培養(yǎng)與傳代方法

該細(xì)胞為貼壁生長原代細(xì)胞，培養(yǎng)需遵循原代肺細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)規(guī)范，重點(diǎn)兼顧其原代細(xì)胞特性及大額牛細(xì)胞的生長需求，避免細(xì)胞脫落、損傷或功能異常，具體操作方法如下：一是培養(yǎng)體系，推薦使用含10%-15%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，添加適量雙抗（青mei素+鏈mei素）及肺細(xì)胞專用生長因子，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基需提前預(yù)熱至37℃，避免溫度驟變損傷細(xì)胞，同時(shí)定期更換培養(yǎng)基（每2-3天更換一次），保持培養(yǎng)基營養(yǎng)充足，減少代謝廢物積累，契合原代細(xì)胞體外培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)要求，選擇優(yōu)質(zhì)血清可進(jìn)一步提升細(xì)胞生長狀態(tài)；二是細(xì)胞復(fù)蘇，將凍存細(xì)胞從液氮中取出，快速放入37℃水浴中1-2分鐘解凍，解凍后立即用70%酒精消毒凍存管表面，無菌操作將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，800-1000r/min離心5分鐘，棄去上清液，加入預(yù)熱的wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕輕吹打至單細(xì)胞懸液，接種至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，復(fù)蘇成活率≥90%，復(fù)蘇后24小時(shí)內(nèi)細(xì)胞可完成貼壁，復(fù)蘇過程嚴(yán)格遵循無菌操作，避免細(xì)胞污染；三是細(xì)胞傳代，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代，傳代前用PBS輕輕潤洗細(xì)胞表面2次，去除殘留培養(yǎng)基，加入適量yi酶-EDTA消化液，37℃孵育2-3分鐘，倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞形態(tài)變圓、間隙增大時(shí)，立即加入wan全培養(yǎng)基終止消化，用彎頭滴管輕輕吹打細(xì)胞表面，使細(xì)胞脫落并分散為單細(xì)胞懸液，離心后重懸細(xì)胞，傳代比例建議為1:2-1:3，接種至新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，每3-4天傳代一次，傳代過程中吹打動(dòng)作輕柔，避免劇烈震蕩導(dǎo)致細(xì)胞損傷，同時(shí)控制消化時(shí)間，避免過度消化影響細(xì)胞貼壁能力及生理功能；四是培養(yǎng)注意事項(xiàng)，培養(yǎng)過程中避免頻繁移動(dòng)培養(yǎng)瓶，防止細(xì)胞脫落；若細(xì)胞貼壁能力下降，可在培養(yǎng)瓶表面預(yù)先包被多聚賴氨酸，提升貼壁效果；定期觀察細(xì)胞形態(tài)及生長狀態(tài)，若出現(xiàn)細(xì)胞聚集、貼壁不牢、形態(tài)異常等情況，及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)條件或更換培養(yǎng)基；培養(yǎng)環(huán)境需嚴(yán)格遵循無菌要求，開放操作需在百級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，避免細(xì)胞污染，無菌意識(shí)是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，同時(shí)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，提升實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。

適用實(shí)驗(yàn)場景

該細(xì)胞專為大額牛相關(guān)研究及肺功能相關(guān)科研設(shè)計(jì)，貼合其物種特性及生物學(xué)功能，適配科研、種質(zhì)資源保護(hù)、藥物研發(fā)等多種場景，核心應(yīng)用圍繞大額牛研究、肺生理病理及相關(guān)領(lǐng)域開發(fā)展開，具體包括：一是大額牛相關(guān)研究，用于大額牛肺功能機(jī)制、環(huán)境適應(yīng)性研究，探究該細(xì)胞在氧代謝、肺損傷防御中的特性，助力大額牛種質(zhì)資源保護(hù)及分子系統(tǒng)發(fā)生研究，分析大額牛與其他牛屬物種的肺細(xì)胞功能差異；二是肺生理與肺損傷研究，模擬肺損傷、呼吸窘迫綜合征等病理狀態(tài)，利用該細(xì)胞研究肺表面活性物質(zhì)的分泌機(jī)制及肺損傷修復(fù)過程，分析肺表面活性物質(zhì)在維持肺泡穩(wěn)定性、減輕肺損傷中的作用，為肺損傷相關(guān)疾病的研究提供實(shí)驗(yàn)支撐；三是畜牧獸醫(yī)研究，用于大額牛肺部疾病的發(fā)病機(jī)制研究，檢測致病因素對(duì)該細(xì)胞的影響，為大額牛肺部疾病的預(yù)防、診斷及治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，助力大額牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展；四是藥物研發(fā)與篩選，用于肺保護(hù)類藥物、抗肺損傷藥物的篩選及療效評(píng)估，檢測藥物對(duì)該細(xì)胞活性、肺表面活性物質(zhì)分泌的調(diào)控作用，同時(shí)可用于相關(guān)畜牧藥物的臨床前研究，為藥物研發(fā)提供可靠的細(xì)胞模型；五是基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，可用于原代細(xì)胞分離、培養(yǎng)技術(shù)的教學(xué)，以及肺細(xì)胞形態(tài)觀察、免疫熒光染色、Western blotting等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，同時(shí)可用于太赫茲光譜檢測等新型實(shí)驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用研究，探究細(xì)胞形態(tài)變化對(duì)光譜特性的影響；六是生物醫(yī)學(xué)拓展研究，可作為牛肺相關(guān)研究的模式細(xì)胞，用于肺表面活性物質(zhì)提取、抑tai酶等生物活性物質(zhì)的相關(guān)研究，為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的肺相關(guān)研究提供參考。

備注：（具體細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、肺表面活性物質(zhì)檢測及實(shí)驗(yàn)操作方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書）

儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)

儲(chǔ)存方面，該細(xì)胞凍存狀態(tài)下需置于液氮中長期保存，有效期為12個(gè)月，凍存液推薦使用含10%DMSO+20%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，采用梯度降溫法凍存（4℃預(yù)冷30分鐘，-80℃過夜，再轉(zhuǎn)入液氮），避免細(xì)胞損傷；短期儲(chǔ)存可置于-80℃超低溫冰箱，保存時(shí)間不超過1個(gè)月，避免反復(fù)凍融，防止細(xì)胞活性下降及貼壁能力、生理功能喪失，同時(shí)需進(jìn)行儲(chǔ)存過程中的穩(wěn)定性檢測，確保細(xì)胞活性、純度等指標(biāo)符合要求，契合細(xì)胞庫儲(chǔ)存相關(guān)規(guī)范。注意事項(xiàng)包括：產(chǎn)品僅供科研使用，不用于臨床治療診斷；細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需快速解凍，避免反復(fù)凍融，解凍后及時(shí)接種，防止細(xì)胞活力下降及貼壁能力喪失，復(fù)蘇后24小時(shí)內(nèi)避免移動(dòng)培養(yǎng)瓶，確保細(xì)胞正常貼壁；培養(yǎng)過程中需嚴(yán)格遵循無菌操作原則，禁止共用培養(yǎng)耗材，開放操作需在消毒后的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，避免細(xì)胞污染，若發(fā)生污染需及時(shí)處理，不可繼續(xù)培養(yǎng)；傳代時(shí)控制消化時(shí)間，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞活性下降，吹打動(dòng)作輕柔，避免劇烈震蕩，防止細(xì)胞脫落或損傷；細(xì)胞培養(yǎng)過程中定期觀察細(xì)胞形態(tài)及生長狀態(tài)，若出現(xiàn)細(xì)胞死亡過多、貼壁不牢、形態(tài)異常等情況，及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)條件，同時(shí)關(guān)注肺表面活性物質(zhì)分泌情況，維持細(xì)胞生理功能；過期細(xì)胞及污染細(xì)胞嚴(yán)禁使用，廢棄細(xì)胞及培養(yǎng)廢液需按照生物安全規(guī)范妥善處理；運(yùn)輸過程中采用干冰運(yùn)輸，避免高溫、劇烈震蕩，確保細(xì)胞活力，運(yùn)輸后需及時(shí)復(fù)蘇或轉(zhuǎn)移至對(duì)應(yīng)儲(chǔ)存環(huán)境，同時(shí)開展運(yùn)輸后的穩(wěn)定性檢測，確定運(yùn)輸條件的合理性。

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