LC-MS/MS方法 | 測定血漿中的葉酸及代謝物

閱讀：895發(fā)布時間：2025-1-16

相關(guān)背景

Introduction

葉酸（維生素 B9）是人體必需的一種水溶性維生素，它在胎兒正常發(fā)育、紅細胞形成、心血管健康、免疫系統(tǒng)和精神健康方面都有非常重要的作用。葉酸在人體細胞中無法合成，因此只能通過從外界攝取獲得。

同時，臨床中妊娠期女性的葉酸（維生素B9）狀態(tài)評估非常重要，能否保證葉酸的合理攝入對孕婦及胎兒的生命和健康有著至關(guān)重要的影響。因此許多國家建議女性從懷孕前一個月或三個月時開始補充葉酸(維生素B9)。

從這種實際需求出發(fā)，Restek 基于 LC-MS / MS 平臺，在 HILIC-Si 色譜柱上建立了孕婦血漿中葉酸及代謝物的檢測方法，針對性地解決相關(guān)的臨床診斷問題。

分析方法

以 Raptor HILIC-Si 柱測定血漿中的葉酸及代謝物，結(jié)果如下：

Restek 色譜圖：LC_CF0698

峰	tR(min)	濃度 (ng/mL)	母離子	子離子
5-甲酰四氫葉酸	2.23	50	474.2	327.0
葉酸	2.23	25	442.2	295.0
5-甲基四氫葉酸	2.25	25	460.3	313.0

色譜條件
色譜柱	Raptor HILIC-Si (貨號：9310A5E)
規(guī)格	50 mm x 3.0 mm ID
粒徑	2.7 µm
柱溫	30 °C
標準品 / 樣品
標準品 / 樣品
溶劑	乙腈（20 mM 乙酸銨）：水 = 80 : 20，含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol
濃度	樣品前處理后最終濃度 6.25 ng / mL
進樣量	5 µL
流動相
A	水 : 乙腈 = 50 : 50，20 mM 乙酸銨
B	水 : 乙腈 = 20 : 80，20 mM 乙酸銨

時間(min)	流速(mL/min)	%B
0.00	0.5	100
3.00	0.5	0
3.20	0.5	0
3.21	0.5	100
5.21	0.5	100

最大壓力	344 bar
檢測器	MS / MS
離子化方式	ESI +
掃描模式	MRM
儀器	UHPLC
樣品制備
1. 取 380 μL 含有 100μg / mL 2-Mercaptoethanol的血漿（K2EDTA，2x 活性炭處理），加入 20 μL 強化溶液。 2. 渦旋 2 分鐘，以 4000 rpm 離心 2 分鐘。 3. 用 1 mL 甲醇活化 EVOLUTE EXPRESS WAX 30 mg SPE板（Biotage 604-0030-PX01），然后用 1 mL 2% 甲酸）平衡。打開真空泵，將 SPE 板全干燥。 4. 將 400 μL 樣品加載到 SPE 板上并施加真空。 5. 用 1 mL 水清洗 SPE 板,然后抽真空使之全干燥。 6. 以 300 μL 含 5% 氨水的甲醇（含 10 mg / mL 的 2-Mercaptoethanol）作為洗脫溶劑。啟動真空泵進行洗脫。 7. 將提取物在 30°C 下氮氣吹干。 8. 用 200 μL 流動相 B（含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol）復(fù)溶，進行上機測試。 * 注：整個樣品制備過程是在昏暗的燈光下進行的。

解決方案

除此之外，Restek 還可提供同時分析多種水溶性維生素解決方案：

Restek 色譜圖：LC_FF0558

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