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LC 應(yīng)用方案 | 毒理學(xué)常用液相色譜柱
閱讀：364發(fā)布時(shí)間：2025-8-5
LC 應(yīng)用方案 | 毒理學(xué)常用液相色譜柱
前言 Restek LC
我們知道液相色譜柱有多種類型，每種類型都有自己的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，具體選擇哪種色譜柱取決于您的分析需求。新方法建立之初需要研究不同類型固定相的特征，特別是當(dāng)含有關(guān)鍵峰對(duì)時(shí)，固定相的選擇尤其關(guān)鍵。毒物分析實(shí)驗(yàn)室的分析物通常包括濫用藥物、治療藥物、非處方藥物和酒精代謝物。分析物的極性和結(jié)構(gòu)差異會(huì)在很大程度上影響它們與不同固定相的相互作用。
遺憾的是，并沒(méi)有一個(gè)“萬(wàn)能"的固定相可以有效分析毒理學(xué)涉及的所有化合物。大多數(shù)情況下，方法開(kāi)發(fā)人員都需要使用幾種不同的固定相來(lái)滿足對(duì)不同分析物的分析需求。要找出適合的色譜柱，除了可以逐一嘗試，您也可以繼續(xù)閱讀本文，我們將為您介紹多種毒物分析方法開(kāi)發(fā)中應(yīng)該嘗試的固定相類型。
大多數(shù)方法開(kāi)發(fā)人員將 C18 色譜柱視為反相色譜中的“通用"或“首_選"色譜柱。C18 是一種成熟可靠的選擇，非常適合分析毒理學(xué)中常見(jiàn)的大量 / 多類分析物。C18 固定相能夠通過(guò)疏水作用實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物的保留，所以它們?cè)诜治鼍哂胁煌瑯O性的分析物時(shí)是一個(gè)不錯(cuò)的選擇，但它們對(duì)一些芳香族關(guān)鍵異構(gòu)體的選擇性會(huì)稍差些。
當(dāng)然 C18 可以有效分析一些難分離的化合物。甲基_苯丙_胺和苯丙_胺的 D 型和 L 型異構(gòu)體通常需要手性色譜柱才能實(shí)現(xiàn)分離，但是手性柱不僅昂貴，用途也不是很廣泛。對(duì)于不想用手性柱的實(shí)驗(yàn)室，可以按照簡(jiǎn)單的衍生化方法在標(biāo)準(zhǔn) C18 色譜柱上進(jìn)行分離（見(jiàn)下圖）。即使 C18 無(wú)法分離毒理學(xué)分析范圍內(nèi)的每種待測(cè)物，您的柜子中仍然應(yīng)該有一支 C18 作為備用。
優(yōu)勢(shì)：
C18 是一種多功能的成熟固定相，可以分析大量具有不同極性的待測(cè)物。
弱勢(shì)：
C18 不具備完_全分離藥物 / 濫用藥物中許多關(guān)鍵異構(gòu)體的能力。
雖然聯(lián)苯固定相不如 C18 應(yīng)用廣，但它的確具有自身的優(yōu)勢(shì)。它的最大_優(yōu)勢(shì)是對(duì)芳香族化合物具有一定的結(jié)構(gòu)識(shí)別能力，這使得它特別擅長(zhǎng)分離關(guān)鍵的異構(gòu)體。這種特性來(lái)自聯(lián)苯官能團(tuán)與待測(cè)物的 π 電子之間的 π-π 作用。因甲醇結(jié)構(gòu)中不含 π 電子，不會(huì)干擾待測(cè)物與聯(lián)苯官能團(tuán)之間的 π-π 作用，因此當(dāng)使用聯(lián)苯柱時(shí)應(yīng)當(dāng)首_選甲醇作為有機(jī)相，這有助于完_全釋放聯(lián)苯的潛力。聯(lián)苯固定相可以分離在 C18 或苯基柱上分離較差的化合物，在某些情況下聯(lián)苯固定相的增強(qiáng)選擇性也有助于最大限度地減少基質(zhì)干擾（見(jiàn)下圖）。
優(yōu)勢(shì)：
聯(lián)苯色譜柱比 C18 和其他苯基柱有更強(qiáng)的選擇性，能分離關(guān)鍵異構(gòu)體、減少基質(zhì)干擾。
弱勢(shì)：
聯(lián)苯不像 C18 那樣常用，因此方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中可能需要進(jìn)行更多的自行優(yōu)化工作。
一般來(lái)說(shuō)，C18 和聯(lián)苯柱組合即可成功分析毒理學(xué)檢測(cè)范圍內(nèi)的化合物。不過(guò)，大_麻素異構(gòu)體的分析是其中一個(gè)例外。確定大_麻使用情況的典型毒理學(xué)測(cè)試包括分析大_麻中的主要精神活性成分 Δ9-THC 及其兩種代謝物 11-OH-Δ9-THC 和 Δ9-THC-COOH。Δ8-THC（Δ9-THC 的一種異構(gòu)體）的出現(xiàn)，使得實(shí)驗(yàn)室也必須將這種化合物及其代謝物納入其測(cè)試范圍。這份更新的化合物列表包含六種分析物、三對(duì)異構(gòu)體，需要完_全分離才能出具準(zhǔn)確報(bào)告。C18 和聯(lián)苯色譜柱的選擇性不足以充分分離三對(duì)異構(gòu)體，但氟苯基色譜柱對(duì)此具有充分的選擇性。
正如我們之前所討論的，C18 色譜柱通過(guò)疏水作用實(shí)現(xiàn)分離，聯(lián)苯柱的保留原理為 π-π 作用。除了色散力、形狀選擇性外，氟苯基柱還有陽(yáng)離子交換和偶極作用兩種保留機(jī)理。正是這種多保留機(jī)制使氟苯基色譜柱能夠?qū)崿F(xiàn)獨(dú)_特的分離效果。對(duì)于需要分析 THC 異構(gòu)體的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，氟苯基柱是這一艱難分離的必選色譜柱（見(jiàn)下圖）。
優(yōu)勢(shì)：
氟苯基色譜柱具有獨(dú)_特的選擇性，可以滿足毒理學(xué)中 THC 異構(gòu)體的分離。
弱勢(shì)：
氟苯基可能需要比 C18 和聯(lián)苯更長(zhǎng)時(shí)間的平衡和再平衡。
乙基葡糖苷酸（EtG）和硫酸乙酯（EtS）一般作為監(jiān)測(cè)酒精使用的生物標(biāo)志物。EtG 和 EtS 一般用 LC-MS/MS 分析，分析中面臨的主要問(wèn)題有三個(gè)，一是目標(biāo)物極性高保留差；二是目標(biāo)物與基質(zhì)干擾物容易共洗脫，容易遇到基質(zhì)抑制問(wèn)題；三是運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)。Raptor EtG / EtS 色譜柱是 Restek 專門(mén)為解決這些痛點(diǎn)而開(kāi)發(fā)的獨(dú)_特固定相。EtG / EtS 色譜柱可為兩種化合物提供穩(wěn)定、一致的保留，并與基質(zhì)完_全分離，避免基質(zhì)干擾（見(jiàn)下圖）。
優(yōu)勢(shì)：
該色譜柱具有獨(dú)_特的選擇性，專門(mén)用于酒精代謝物分析。
弱勢(shì)：
為獲得最佳結(jié)果，該色譜柱需要使用基質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)；
本色譜柱具有特定用途，不適用于分析大量目標(biāo)化合物。
結(jié)語(yǔ) Restek LC
毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室需要分析的化合物一般范圍廣泛、更新迅速且其化學(xué)性質(zhì)差異巨大。這些化合物中的大多數(shù)可以用 C18 和聯(lián)苯柱實(shí)現(xiàn)成功分析，它們具有互補(bǔ)的選擇性。然而，THC 異構(gòu)體和 EtG / EtS 等具有挑戰(zhàn)性的分離將需要方法開(kāi)發(fā)人員使用其它色譜柱，如 FluoroPhenyl / 氟苯基或 EtG / EtS 專用柱。
為了更好地協(xié)助方法開(kāi)發(fā)人員建立相應(yīng)分析方法，Restek 特提供色譜柱試用服務(wù)，關(guān)于方法的任何細(xì)節(jié)問(wèn)題，歡迎您隨時(shí)聯(lián)系 Restek 技術(shù)團(tuán)隊(duì)
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