今天主要來(lái)講講熒光定量PCR檢測(cè)原理

閱讀：4853 發(fā)布時(shí)間：2021-11-16

熒光定量PCR光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)：

1、光源：五個(gè)LED，各LED激發(fā)波長(zhǎng)不同，保證每個(gè)通道的熒光素由優(yōu)質(zhì)的激發(fā)光激發(fā)。

2、探測(cè)器：CCD，確保整板同時(shí)檢測(cè)，數(shù)據(jù)間可比性強(qiáng)。

3、激發(fā)波長(zhǎng)范圍：475nm-640nm。

4 發(fā)射波長(zhǎng)范圍：520nm-740nm。

5、五個(gè)檢測(cè)通道：可同時(shí)能做四色檢測(cè)。

6、線性范圍：11個(gè)數(shù)量級(jí)。

7、靈敏度：可檢測(cè)到單拷貝。

所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

檢測(cè)方法：

1、SYBRGreenⅠ法：

在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。

SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖

PCR產(chǎn)物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性）。

2、TaqMan探針?lè)ǎ?/div>

探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

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