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多組分樣品的分離分析可以借助熒光光度計(jì)的同步熒光光譜法來實(shí)現(xiàn)。在激發(fā)光譜測(cè)定中，先固定熒光波長(zhǎng)，然后掃描激發(fā)分光器的波長(zhǎng)；在熒光光譜測(cè)定中，則先固定激發(fā)波長(zhǎng)，然后掃描熒光分光器的波長(zhǎng)。而在同步熒光光譜測(cè)定中，錯(cuò)開激發(fā)和熒光分光器的開始掃描波長(zhǎng)，將兩波長(zhǎng)差（Δ λ）保持為固定值，按照相同掃描速度同時(shí)對(duì)兩側(cè)分光器進(jìn)行掃描并測(cè)定。檢測(cè)器接收到的是由激發(fā)分光器波長(zhǎng)激發(fā)而發(fā)射的與激發(fā)波長(zhǎng)偏移Δ λ 處熒光發(fā)射波長(zhǎng)的強(qiáng)度，通過選擇合適的Δ λ 可以進(jìn)行目標(biāo)成分的分離。 

本文向您介紹同步熒光法的原理，以及使用圖1 所示的熒光分光光度計(jì)RF-6000 對(duì)多環(huán)芳香族化合物的混合樣品進(jìn)行分析的示例。

為了從視覺上理解同步熒光法，圖2 顯示了虛擬激發(fā)光譜和熒光光譜。 假設(shè)通過波長(zhǎng)λ1 激發(fā)時(shí)，根據(jù)波長(zhǎng)λEM 計(jì)算得到強(qiáng)度F1 的熒光光譜。將激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)為λ2 時(shí)，可以通過波長(zhǎng)λEM 獲得與強(qiáng)度F1的熒光光譜相似的強(qiáng)度F2 的熒光光譜。 對(duì)于該激發(fā)光譜和熒光光譜，通過兩個(gè)光譜的波長(zhǎng)差 Δ λ（= λEM -λ1）同時(shí)掃描激發(fā)波長(zhǎng)和熒光波長(zhǎng)，從而測(cè)定同步熒光光譜。激發(fā)波長(zhǎng)為λ4 時(shí)，波長(zhǎng)λEM 的熒光強(qiáng)度為F4，但是，因?yàn)樵谕綗晒夤庾V測(cè)定中，熒光波長(zhǎng)為移動(dòng)了Δ λ 的λ7（= λ4 + Δ λ），所以強(qiáng)度F4 的熒光光譜λ7 的熒光強(qiáng)度即為同步熒光光譜的強(qiáng)度。同樣，當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為λ3 時(shí)，波長(zhǎng)λEM 強(qiáng)度F3 的熒光光譜 λ6（= λ3 + Δ λ）的熒光強(qiáng)度即為同步熒光光譜的強(qiáng)度。由此，如果在激發(fā)波長(zhǎng)和熒光波長(zhǎng)的間隔保持在Δ λ 的狀態(tài)下進(jìn)行掃描，則可以得到如紅線所示的同步熒光光譜。 如圖2 所示，同步熒光光譜與原熒光光譜相比，半寬度變窄，并且，將Δ λ 設(shè)為激發(fā)光譜和熒光光譜的波長(zhǎng)差時(shí)，同步熒光光譜的峰強(qiáng)度會(huì)達(dá)到大

環(huán)芳烴化合物的同步熒光光譜測(cè)定：

制備芘（濃度2.9 μg/mL）、苯并(a)芘（濃度1.6 μg/mL）、苯并(k)熒蒽（濃度2.0 μg/mL）的環(huán)己烷溶液，使用熒光分光光度

計(jì)RF-6000 進(jìn)行測(cè)定。表1 為測(cè)定條件；圖3 為測(cè)定結(jié)果。由此可知，芘、苯并(a)芘、苯并(k)熒蒽的激發(fā)波長(zhǎng)分別為335 nm、 

385 nm、308 nm。在上述濃度下測(cè)定時(shí)，苯并(k)熒蒽的熒光強(qiáng)度大，大約是熒光強(qiáng)度最小的芘的40 倍。為了更加容易確認(rèn)芘和苯并(a)芘的熒光光譜，放大了圖3 的熒光光譜（圖4）。 在同步熒光法中，為了使芘的峰強(qiáng)度變?yōu)榇螅瑢④诺臒晒?/p>

光譜中大峰強(qiáng)度的波長(zhǎng)（382 nm）和芘的激發(fā)波長(zhǎng)（335 nm）之差（47 nm）作為為激發(fā)和熒光分光器的波長(zhǎng)差。圖5 為根據(jù)該波長(zhǎng)差測(cè)定得到的芘、苯并(a)芘、苯并(k)熒蒽的同步熒光光譜；表2 為測(cè)定條件。由此可知，苯并(k)熒蒽和芘的大峰強(qiáng)度比大約減少到8 倍，芘的峰強(qiáng)度相對(duì)提高，并且高度分離了芘的峰。

綜上所述，使用RF-6000 的同步熒光光譜測(cè)定功能可以進(jìn)行混合物的分離。因?yàn)橥綗晒夥ㄍㄟ^選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)差分離混合物，所以可以在各種領(lǐng)域發(fā)揮作用。