牛熱休克蛋白-70抗體(HSP-70-Ab)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書

　　以下是牛熱休克蛋白-70抗體(HSP-70-Ab)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明摘要：

　　BS-3989 牛熱休克蛋白-70抗體(HSP-70-Ab)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。通過包被抗體捕獲樣本中的HSP-70-Ab，加入HRP標(biāo)記檢測抗體后，經(jīng)TMB顯色反應(yīng)，顏色深淺與目標(biāo)物濃度成正比。

　　二、試劑盒組成

　　主要組分?：

　　預(yù)包被微孔板(96孔)

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品(通常含2瓶，需用稀釋液 reconstitute 至10 ng/mL)

　　樣品稀釋液(20mL)

　　HRP標(biāo)記檢測抗體(120μL，需1:100稀釋)

　　TMB顯色底物(A/B液分裝)

　　終止液(2N H2SO4)

　　自備物品?：

　　酶標(biāo)儀(450nm濾光片)

　　微量移液器及吸頭

　　37℃恒溫箱

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：3000rpm離心10-30分鐘，避免溶血或反復(fù)凍融。

　　組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清。

　　保存?：分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融。

　　四、操作步驟

　　試劑平衡?：所有組分室溫平衡15-30分鐘。

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：從10 ng/mL起始進(jìn)行倍比稀釋(建議7個(gè)梯度)。

　　加樣與孵育?：

　　每孔依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品(100μL)、檢測抗體(50μL)，37℃孵育60分鐘。

　　洗滌?：使用稀釋后的洗滌液(1:25)洗板5次。

　　顯色?：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘。

　　終止與檢測?：加終止液后30分鐘內(nèi)測450nm OD值。

　　五、注意事項(xiàng)

　　濃洗滌液結(jié)晶可37℃水浴溶解。

　　避免板條開封后受潮，未用完需密封保存。

　　不同批次試劑不可混用。

　　高濃度樣本需預(yù)稀釋(計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù))。

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計(jì)算。

　　注：以上資料僅供參考，具體如需完整說明，建議聯(lián)系供應(yīng)商獲取。

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