人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-1691人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒

　　以下是關(guān)于人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒的實驗使用說明，綜合了多個可靠來源的操作指南和技術(shù)要點?：

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法：將純化的EGFR捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體，依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后加入TMB底物顯色，顏色深度與EGFR濃度呈正相關(guān)，最終在450nm波長下測定OD值?。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔或48孔配置?

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉需用稀釋液復(fù)溶(典型濃度800pg/ml或4,000fmol/L)?

　　檢測抗體?：生物素標(biāo)記的抗EGFR抗體?

　　顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B、終止液?

　　洗滌緩沖液?：需按說明書稀釋?

　　三、樣本處理

　　樣本類型 處理方法

　　血清/血漿 2-8℃離心20分鐘(1000g)，避免反復(fù)凍融?

　　組織勻漿 按1:9重量比加入PBS勻漿，5000g離心5-10分鐘?

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清 直接離心(1000g，20分鐘)或-20℃保存?

　　四、操作步驟

　　加樣?

　　空白孔加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔梯度稀釋(建議雙孔檢測)，樣本孔加50μl?

　　37℃孵育40分鐘?

　　洗滌?

　　使用1×洗滌液，每孔350μl，浸泡1-2分鐘后拍干，重復(fù)4-6次?

　　加檢測抗體?

　　每孔加100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育30分鐘?

　　顯色與終止?

　　加入TMB底物避光反應(yīng)15-20分鐘，顯藍(lán)色后加終止液變黃色?

　　五、關(guān)鍵參數(shù)

　　檢測范圍?：3.9-250pg/mL(EGF)或156-10,000pg/mL(EGFR)?

　　靈敏度?：≤1.6pg/mL?

　　重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%?

　　六、注意事項

　　所有液體組分使用前需充分混勻，避免泡沫?

　　不同濃度樣本需更換槍頭防止交叉污染?

　　顯色時間需根據(jù)實際調(diào)整，底物變藍(lán)即失效?

　　實驗廢棄物應(yīng)按生物危害物處理?

　　注：以上資料僅供參考，如需具體品牌的操作視頻或標(biāo)準(zhǔn)曲線建立方法，可參考以下補充說明?。

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