人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書

　　BS-0083人瘦素(LEP)ELISA試劑盒

　　以下是綜合多個(gè)高可信度來源整理的人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書，涵蓋實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及關(guān)鍵注意事項(xiàng)：

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。純化的抗LEP抗體包被微孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本、生物素標(biāo)記抗體及HRP標(biāo)記親和素，形成復(fù)合物。TMB顯色后，顏色深淺與瘦素濃度呈正相關(guān)，通過450nm波長測(cè)定OD值計(jì)算濃度。

　　二、試劑盒組成?

　　組分 規(guī)格/說明 保存條件

　　預(yù)包被微孔板 96孔 2-8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉(濃度梯度0.15-50ng/mL) -20℃

　　生物素標(biāo)記抗體 100μL(1:100稀釋) 2-8℃

　　HRP標(biāo)記親和素 100μL(1:100稀釋) 2-8℃

　　顯色劑A/B液 各6mL 避光2-8℃

　　終止液 6mL(2N H?SO?) 2-8℃

　　20×洗滌緩沖液 20mL 室溫(結(jié)晶需水浴溶解)

　　三、樣本處理?

　　血清/血漿?

　　室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000×g，20分鐘)，避免溶血。

　　血漿需EDTA/肝素抗凝，離心后取上清。

　　組織勻漿?

　　按1:9(w/v)加入PBS勻漿，離心取上清。

　　細(xì)胞上清?

　　直接離心(2000×g，10分鐘)去除顆粒。

　　保存條件?：-20℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。

　　四、操作步驟?

　　試劑平衡?：從冰箱取出后室溫平衡20分鐘。

　　加樣?

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔?：加入50μL梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。

　　樣本孔?：加入10μL樣本+40μL樣本稀釋液。

　　溫育?

　　37℃孵育60分鐘，洗滌后加入生物素抗體，再孵育30分鐘。

　　顯色與終止?

　　TMB顯色15分鐘，加終止液后15分鐘內(nèi)測(cè)OD值。

　　五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?

　　洗滌?：手工洗板需拍干，自動(dòng)洗板機(jī)每孔加350μL洗滌液。

　　顯色控制?：避免顯色時(shí)間過長導(dǎo)致背景升高。

　　儀器校準(zhǔn)?：使用前確認(rèn)酶標(biāo)儀波長準(zhǔn)確性。

　　六、結(jié)果計(jì)算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計(jì)算。若樣本OD值超出范圍，需用稀釋液稀釋后重測(cè)。

　　注：以上資料僅供參考，本試劑盒僅用于科研，不可用于臨床診斷。

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