人白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　BS-9770人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)，專用于定量檢測人血清、血漿及相關(guān)生物液體樣本中白細(xì)胞介素17(IL-17)的含量。IL-17是一種由Th17細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子，在自身免疫疾病和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。

　　二、檢測原理

　　雙抗體夾心技術(shù)：

　　預(yù)包被抗人IL-17單抗的微孔板捕獲樣本中的IL-17。

　　加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。

　　通過TMB顯色反應(yīng)，顏色深淺與IL-17濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定吸光度(OD值)。

　　三、試劑盒組成

　　組分規(guī)格(96孔配置)保存條件

　　酶標(biāo)包被板1×96孔2–8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品(270ng/L)0.5ml×1瓶2–8℃(長期-20℃)

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶2–8℃

　　酶標(biāo)試劑6ml×1瓶2–8℃

　　樣品稀釋液6ml×1瓶2–8℃

　　顯色劑A/B液各6ml×1瓶2–8℃避光

　　終止液6ml×1瓶2–8℃

　　濃縮洗滌液20ml×30倍×1瓶2–8℃

　　說明書1份室溫

　　四、樣本處理要求

　　血清/血漿：

　　室溫靜置10–20分鐘，2000–3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取上清液

　　避免反復(fù)凍融，若出現(xiàn)沉淀需再次離心

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清：

　　離心后取上清，檢測分泌性成分時需無菌操作

　　尿液/組織勻漿：

　　尿液離心后取上清;組織樣本需勻漿后離心分裝

　　五、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：

　　梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品(如270ng/L至1ng/L)，每孔加樣50μL

　　樣本加樣：

　　樣本稀釋后加10μL至微孔，加樣量40μL(總稀釋度5倍)

　　溫育：

　　37℃避光反應(yīng)30分鐘，封板膜覆蓋

　　洗滌：

　　洗滌液浸泡1分鐘/次，重復(fù)3–5次，拍干孔內(nèi)液體。

　　顯色與終止：

　　加入TMB顯色液避光反應(yīng)15–20分鐘，終止液終止反應(yīng)。

　　讀數(shù)：

　　酶標(biāo)儀450nm波長測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。

　　六、性能指標(biāo)

　　靈敏度：低至0.1pg/mL(小鼠IL-17參考值) ，人IL-17約3.8pg/mL。

　　檢測范圍：7.8–500pg/mL(人IL-17C參考值) ，或31.3–2000pg/mL(人IL-17)。

　　特異性：與IL-17家族其他成員(如IL-17B、IL-17F)無交叉反應(yīng)。

　　重復(fù)性：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%

　　七、注意事項

　　保存條件：

　　試劑盒2–8℃保存，標(biāo)準(zhǔn)品長期存放需-20℃

　　有效期：

　　6個月(4℃)，12個月(-20℃)。

　　實驗環(huán)境：

　　避免強光照射，顯色液需37℃預(yù)平衡。

　　八、參考文獻

　　雙抗體夾心法原理及操作規(guī)范

　　樣本處理與保存指南

　　試劑盒性能驗證數(shù)據(jù)

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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