陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為如今火熱的研究方向之一，如何選擇制備材料是我們需要了解的首要部分。本期AVT小編要介紹的即是在陽(yáng)離子脂質(zhì)體制備中使用***多的DOTAP。

 根據(jù)包載的API不同，可將陽(yáng)離子脂質(zhì)體分為兩大類，一類是包載以mRNA、siRNA為**的核酸類藥物的脂質(zhì)體，是基因**中研究***多、應(yīng)用***廣的一種非病毒載體；另一類是包載如紫杉醇、喜樹堿等小分子**藥的脂質(zhì)體制劑，具有**新生血管靶向性，對(duì)**也有雙重機(jī)制作用下的好療效。DOTAP是在陽(yáng)離子脂質(zhì)體制備中使用***多的藥用輔料。

 常見的DOTAP（Cl），分子式C₄₂H₈₀NO₄Cl，分子量698.6，是一種季銨鹽，是帶正電荷的兩親性類脂化合物。因?yàn)樯a(chǎn)工藝的不同，有些性狀呈淡黃色蠟狀，而工藝好的公司生產(chǎn)的DOTAP則是白色粉末，更便于稱量等實(shí)際操作。它是兩親分子，結(jié)構(gòu)主要由極性頭部(親水基團(tuán))、連接基團(tuán)、疏水尾部三部分組成。極性頭部通常由叔胺或季銨鹽構(gòu)成，后來又研究出咪唑頭部、氨基酸頭部等。其極性頭部情況對(duì)核酸分子的包載效率以及細(xì)胞毒性均有重要的影響。因含雙鍵和正電荷，DOTAP光敏易氧化易吸濕，氧化后會(huì)發(fā)黃、變黏，因此實(shí)驗(yàn)時(shí)操作需快。

 DOTAP***早應(yīng)用的商業(yè)化產(chǎn)品是轉(zhuǎn)染試劑。DOTAP的極性頭部通過靜電作用與帶有負(fù)電荷的DNA分子穩(wěn)定結(jié)合，兩者混合后可自發(fā)形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種轉(zhuǎn)染方法非常溫和，可避免脂質(zhì)轉(zhuǎn)染或者其它方式轉(zhuǎn)染帶來的細(xì)胞毒性作用，并且轉(zhuǎn)染效率高于其它的脂質(zhì)試劑。

 對(duì)于核酸藥物脂質(zhì)體而言，**中DOTAP用量越大載藥量及轉(zhuǎn)染效率自然越高，但隨之而來細(xì)胞毒性也越大，制劑安全性受影響，因此兩者需平衡。學(xué)術(shù)部的同事曾做過小鼠實(shí)驗(yàn)研究即毒性：當(dāng)zeta電位高于+50mV時(shí)即有可能出現(xiàn)注射立即死亡現(xiàn)象。對(duì)于包載化療藥物而言，載藥并不依賴DOTAP，**中可添加其它中性磷脂如DSPC、DPPC等，使用劑量方面受限較小。

 應(yīng)用方面，DOTAP價(jià)格相對(duì)其它種類陽(yáng)離子脂質(zhì)而言較低，性價(jià)比高，是應(yīng)用***多的陽(yáng)離子脂質(zhì)，已在人體上使用——正在進(jìn)行III期臨床試驗(yàn)EndoTAG-1。

 EndoTAG-1是將紫杉醇包埋于帶正電荷的脂質(zhì)體中所得的陽(yáng)離子脂質(zhì)體。**如下：

 與正常脈管系統(tǒng)不同，**內(nèi)皮由于缺乏糖蛋白涂層，進(jìn)而會(huì)形成具有較大負(fù)電荷的細(xì)胞表面。EndoTag-1可選擇性吸附于帶負(fù)電荷的新生**血管內(nèi)皮細(xì)胞上，即只破壞新生血管，不攻擊健康血管。而血管內(nèi)皮細(xì)胞是生長(zhǎng)不可少的，因此EndoTAG-1除了API紫杉醇發(fā)揮**作用外還因DOTAP提供的正電荷抑制**新生血管生成，雙重機(jī)制作用，可有效抑制**生長(zhǎng)。其目前處于全球性的胰腺癌及三陰性乳腺癌III期臨床階段，由中國(guó)臺(tái)灣杏國(guó)藥業(yè)主導(dǎo)，計(jì)劃選擇10個(gè)國(guó)jia/地區(qū)進(jìn)行，現(xiàn)已成功開展：美國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)、法國(guó)、匈牙利、南韓、俄羅斯、以色列等七個(gè)國(guó)jia及地區(qū)的III期臨床試驗(yàn)。在國(guó)內(nèi)，石藥的2類藥“注射用紫杉醇陽(yáng)離子脂質(zhì)體"項(xiàng)目也使用的是DOTAP，于2019年獲CFDA批準(zhǔn)進(jìn)行乳腺癌的I期臨床。

 借鑒EndoTag-1我們可建立基于DOTAP陽(yáng)離子脂質(zhì)體的技術(shù)平臺(tái)，包裹各類小分子化療藥物。如喜樹堿藥物陽(yáng)離子脂質(zhì)體EndoTag-2，是基于拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑原理的新型新生血管靶向劑。DOTAP在小分子化療藥物的陽(yáng)離子脂質(zhì)體開發(fā)上潛力巨大。