賽默飛Stellar質(zhì)譜儀可以提高靈敏度、專屬性和樣本通量，定量更多的分析物，可靠地加快生物標(biāo)志物驗(yàn)證流程。Stellar 質(zhì)譜儀通過協(xié)同結(jié)合三重四極桿技術(shù)的強(qiáng)大定量性能和雙壓線性離子阱技術(shù)的靈敏、超快速全掃描 MSn 采集功能，將其分析能力擴(kuò)展到更廣泛的化合物。

賽默飛Stellar質(zhì)譜儀特點(diǎn)：

1.創(chuàng)紀(jì)錄的大規(guī)模定量性能：一小時(shí)內(nèi)可以穩(wěn)定地定量近10,000種肽，實(shí)現(xiàn)有偏差的系統(tǒng)生物學(xué)分析

2.通量數(shù)據(jù)：絕對(duì)定量更多靶向化合物，以提高定量研究能力，樣本通量提高4倍

3.將靶向定量推向單細(xì)胞水平：利用增強(qiáng)的靈敏度擴(kuò)展靶向通路分析的范圍，同時(shí)減少樣本的缺失值

4.大幅縮減背景干擾，增強(qiáng)特異性：采用快速、靈敏的全掃描同步前體離子選擇 (SPS) MS³ 采集克服具有挑戰(zhàn)性的背景基質(zhì)干擾

5.提升實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)率：使用各種靶向和非靶向數(shù)據(jù)采集方案，加快靶向方法的創(chuàng)建和實(shí)施

 

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Brian Searchle 博士討論了 Stellar 質(zhì)譜儀的優(yōu)勢(shì)

提高 Stellar MS 上低蛋白載量研究的定量靈敏度

可以大規(guī)模將生物標(biāo)志物從發(fā)現(xiàn)階段過渡到驗(yàn)證階段

下載白皮書

"如果我正在開發(fā)新的靶向生物標(biāo)志物檢測(cè)，我將使用類似的平臺(tái)，因?yàn)樗浅錾娜厮臉O桿。"

 

Brian Searle
副教授
俄亥俄州立大學(xué)醫(yī)療中心

規(guī)模化下出色的定量分析性能，可以自信地在單位時(shí)間內(nèi)定量更多的分析物

從發(fā)現(xiàn)到驗(yàn)證以利用靶向定量的轉(zhuǎn)化研究可識(shí)別大量推定的生物標(biāo)記物。為了利用更高的靈敏度和定量準(zhǔn)確度，LC-MS/MS 工作流程必須具有快速采集速度和實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)管理。Stellar 質(zhì)譜儀利用全掃描 MS² 采集的高速度 (高達(dá) 140 Hz) 和自適應(yīng) RT 進(jìn)行動(dòng)態(tài)保留時(shí)間調(diào)整，確保具有高靈敏度和特異性的可重現(xiàn)檢測(cè)，以實(shí)現(xiàn)完整的樣品覆蓋。

 

初始研究從最初在非靶向發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)中評(píng)估的細(xì)胞外囊泡中創(chuàng)建了靶向定量。在60分鐘內(nèi)，共復(fù)制并精確定量了8,686個(gè)胰蛋白酶肽替代物，代表了近2,000種蛋白質(zhì)。使用 Reactome 通路映射評(píng)估定量蛋白，以評(píng)估信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。借助大蛋白集合，可在一次實(shí)驗(yàn)中評(píng)估多個(gè)途徑。

"Stellar 質(zhì)譜儀可以在超出大多數(shù)人想象的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健的靶向定量。"

 

Michael J. MacCoss
基因組科學(xué)教授
華盛頓大學(xué)

使蛋白質(zhì)組學(xué)大眾化：生物液體的高度多重靶向分析

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Stellar MS 通過 60 分鐘的梯度擴(kuò)大了將近9,000種肽的靶向肽定量分析規(guī)模。 總共檢測(cè)了7,666個(gè)肽，變異系數(shù)<20%。

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Fabregat A, et al.Reactome 圖表查看器：用于提高性能的數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)和策略。生物信息學(xué) (英國牛津)。2018 Apr;34(7) 1208-1214. doi: 10.1093/bioinformatics/btx752.PubMed PMID: 29186351.PubMed Central PMCID: PMC6030826.

 

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為了解決不斷擴(kuò)大的實(shí)驗(yàn)規(guī)模，需要更快的數(shù)據(jù)采集速度

靶向代謝物定量分析為利用大規(guī)模研究規(guī)模來確定生物學(xué)的轉(zhuǎn)化研究人員帶來了挑戰(zhàn)。為了提高樣本通量，我們使用更快的色譜梯度進(jìn)行內(nèi)源性代謝物及其同位素富集標(biāo)準(zhǔn)的定量分析，以提高定量準(zhǔn)確性和方法標(biāo)準(zhǔn)化。靶向重/輕對(duì)可提高單位時(shí)間的目標(biāo)容量并減少占空比，但可能會(huì)影響定量性能。

 

憑借 Stellar 質(zhì)譜儀的快速采集速度，它可以提供高質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)，即使在使用毛細(xì)管電泳時(shí)，也能提供1秒寬的峰值寬度。結(jié)果顯示，對(duì)124種化合物的定量準(zhǔn)確性和精確性在不到2分鐘內(nèi)覆蓋了廣泛的濃度范圍（1-500 µM），并與 NIST 參考標(biāo)準(zhǔn)高度一致。

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克服非耗竭血漿蛋白組學(xué)分析中生物標(biāo)記物定量分析的挑戰(zhàn)

在色譜柱上 0.003 至 100 fmol 的稀釋系列中將 PQ500 肽參考試劑盒加標(biāo)至未去除的血漿酶切物中。為799個(gè)重標(biāo)記肽和相應(yīng)的內(nèi)源性（輕）肽創(chuàng)建靶向 MS2 掃描事件。Stellar 質(zhì)譜儀在 96.6% 的重標(biāo)記肽上實(shí)現(xiàn)了精確定量 (CV ≤ 20%) ，其中中位 CV 為 4.72% ，而前一出版物則顯示出 97.9% 的重標(biāo)記肽的精確定量結(jié)果，其中 CV 為 6.1% ，使用2倍長(zhǎng)的梯度，而僅靶向重標(biāo)記肽。

 

線性定量曲線顯示加標(biāo)范圍內(nèi)重到輕的面積值比率的準(zhǔn)確性。插圖顯示了重型（藍(lán)色）肽和輕型（紅色）肽tMS2 結(jié)果在 1 fmol 加樣水平上的 XIC 比較。盡管強(qiáng)度較低且峰寬較窄，但仍為兩種肽類似物獲取了 7 個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，從而獲得肽 ELLDTVAPQK 在色譜柱上的可靠定量，定量下限約為 0.033 fmol柱上量。

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具有穩(wěn)健、可靠的單細(xì)胞靈敏度水平的定量功能

在 Stellar 質(zhì)譜儀上進(jìn)行的靶向蛋白質(zhì)定量可以將定量靈敏度提高到 zmol 水平，并提高樣品通量。

 

Stellar 質(zhì)譜儀可執(zhí)行快速的 tMS2 采集，以擴(kuò)展靶向肽列表，涵蓋可能對(duì)細(xì)胞開發(fā)或其他關(guān)鍵生物功能至關(guān)重要的300多種蛋白。 

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Sting 函數(shù)關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)搜索 PUF60 網(wǎng)絡(luò)和介紹性實(shí)驗(yàn)的相應(yīng)覆蓋范圍，以紅色圓圈表示。

 

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提高選擇性和特異性，以擴(kuò)展定量動(dòng)態(tài)范圍

磷酸化蛋白代表了關(guān)鍵細(xì)胞通路功能的信號(hào)節(jié)點(diǎn)，分析這些功能以確定生物反應(yīng)或擾動(dòng)。磷蛋白中位點(diǎn)特異性磷酸化的靶向定量可以根據(jù)占用率來測(cè)量活性。

 

即使使用 IMAC 或 TiO2 富集，靶向磷酸肽與基質(zhì)肽的相對(duì)豐度也會(huì)影響 tMS2 采集的定量有效性。Stellar 質(zhì)譜儀可以利用 PRM Conductor 軟件智能設(shè)計(jì) tMS3 采集方法，以令人難以置信的靈敏度采集快速同步前體離子選擇 MS³ (SPS MS³) 數(shù)據(jù)，從而提高了靶向磷酸肽實(shí)驗(yàn)的價(jià)值。 

在用于磷酸化蛋白組學(xué)研究的新型二合一低分辨質(zhì)譜儀上對(duì)發(fā)現(xiàn)規(guī)模的平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描進(jìn)行評(píng)估

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平臺(tái)多功能性可以快速創(chuàng)建代謝物定量的方法

小分子方法優(yōu)化通常需要測(cè)定每個(gè)分析物的關(guān)鍵 MS 參數(shù)以實(shí)現(xiàn)靈敏和特異性的數(shù)據(jù)采集。這很耗時(shí)，并且可能會(huì)受到一種碎裂機(jī)理的限制。

 

Stellar 質(zhì)譜儀的快速極性切換和 MSⁿ 采集速度可在一個(gè)或兩個(gè) LC-MSⁿ 實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行完整的分析物表征，而非耗時(shí)的數(shù)小時(shí)或數(shù)天。采集 HCD 模式碎片和共振 CID 模式碎片離子可以產(chǎn)生替代定量策略，省去使用更少特異性的SIM 定量的需要。經(jīng)驗(yàn)證的串聯(lián) MS 質(zhì)譜圖也可以從 Thermo Scientific mzCloud 質(zhì)譜庫導(dǎo)入以進(jìn)行確認(rèn)。 

開發(fā)和實(shí)施用于膳食干預(yù)研究的全面糞便代謝物 LC-MS 文庫

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利用快速 tMS3 采集對(duì)具有挑戰(zhàn)性的脂質(zhì)生物標(biāo)志物進(jìn)行定量分析

可對(duì)參與代謝的關(guān)鍵脂質(zhì)類別三酰甘油酯 (TAG) 進(jìn)行定量分析，以進(jìn)行健康評(píng)估。TAGs同分異構(gòu)體在標(biāo)準(zhǔn)色譜分離方法中通常會(huì)共流出，這就需要使用 MS³ 碎片離子以引入每個(gè)異構(gòu)體所需的特異性，從而完成定量分析。

 

Stellar 質(zhì)譜儀分別采集高達(dá) 140 Hz 和 40 Hz 的快速 tMS2 和 tMS3 數(shù)據(jù)，可在一次實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行定性和定量分析TAG。 

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其他研究支持的解決方案

轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)組學(xué)

Stellar 質(zhì)譜儀提供了新型的轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)組學(xué)可能性，通過更高的特異性實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的更好的定量性能。

蛋白質(zhì)組學(xué)工作流程

定量蛋白質(zhì)組學(xué)

應(yīng)用 Stellar 質(zhì)譜儀可實(shí)現(xiàn) Label-free 和TMT 高通量樣品分析策略的精確定量。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)工作流程

代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)

擴(kuò)展的分析能力通過更快的液相色譜梯度提高實(shí)驗(yàn)室的生產(chǎn)率，以更高的特異性定量更多代謝物和脂質(zhì)。

代謝組學(xué)/脂質(zhì)組學(xué)工作流程