I 型膠原蛋白是皮膚、骨骼和肌腱等結(jié)締組織中含量最豐富的結(jié)構(gòu)蛋白。它是一種合成的前膠原分子，其特征為 300 nm 的三重螺旋結(jié)構(gòu)域，兩側(cè)是球狀的 N 端和 C 端前肽。三螺旋結(jié)構(gòu)域包含 Gly-Xaa-Yaa 三聯(lián)體，其中 Xaa 和 Yaa 通常分別是脯氨酸和羥脯氨酸。前膠原蛋白 N 和 C 蛋白酶活性去除非螺旋前肽， 因此成熟的三螺旋可以自組裝成膠原原纖維，為組織提供拉伸強(qiáng)度。EliKine™人 I 型膠原蛋白 ELISA 定量試劑盒采用雙抗體夾心法來(lái)定量樣品中的人 I 型膠原蛋白。用抗人 I 型膠原蛋白的特異性抗體包被于酶標(biāo)板上，將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入酶標(biāo)板的孔中，其中的人 I 型膠原蛋白會(huì)與包被在板上的固相抗體結(jié)合。未結(jié)合的成分被洗去，然后將生物素化的抗人 I 型膠原蛋白特異性抗體加入孔中。洗滌后，將專有的鏈霉親和素-HRP 偶聯(lián)物加入孔中。生物素化的抗人 I 型膠原蛋白抗體與結(jié)合在包被抗體上的人 I 型膠原蛋白結(jié)合、生物素與鏈霉親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物。在洗滌去除任何未結(jié)合的鏈霉親和素酶試劑后，加入顯色底物（TMB），TMB 在 HRP 催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長(zhǎng)處測(cè) OD 值，人 I 型膠原蛋白濃度與 OD450 值之間呈正比。