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技術(shù)實操丨小鼠開顱手術(shù)全攻略：手把手帶你探秘大腦“第一現(xiàn)場”
在神經(jīng)科學(xué)研究中，穩(wěn)定、可靠的動物模型是探索生命機制與驗證治療策略的基石。小鼠開顱手術(shù)作為構(gòu)建多種腦科學(xué)研究模型的核心技術(shù)，其操作的規(guī)范性與精準(zhǔn)性至關(guān)重要。一次成功的手術(shù)，不僅能最大限度減輕動物損傷，更是保障后續(xù)實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性與可重復(fù)性的關(guān)鍵。
熟練掌握開顱手術(shù)，離不開對腦部解剖結(jié)構(gòu)的深入理解與精細(xì)操作技術(shù)的反復(fù)錘煉。在實際操作中，許多研究者常面臨以下典型問題：
? 如何安全磨除顱骨，確保腦組織完整無損？
? 在固定顱窗玻片時，如何平衡固定強度與成像視野的完整性？
? 術(shù)中無菌操作與術(shù)后動物護(hù)理，有哪些必須重視的細(xì)節(jié)？
本文將圍繞經(jīng)典的小鼠開顱手術(shù)流程展開，通過清晰的步驟演示與關(guān)鍵要點解析，系統(tǒng)梳理該技術(shù)的核心方法。作為“ 雙光子熒光成像小鼠制備手術(shù)”的首篇，本文旨在幫助讀者夯實手術(shù)基礎(chǔ)。未來我們還將陸續(xù)詳解GRIN Lens植入、脊髓開窗、雙光子與EEG電極埋植結(jié)合等更多精細(xì)手術(shù)操作，陪伴您在科研道路上不斷精進(jìn)技術(shù)。
溫馨提示：考慮到您的觀看感受，我們對部分手術(shù)畫面進(jìn)行了柔和處理，請放心觀看。
PART.01術(shù)前準(zhǔn)備
1.手術(shù)器械：兩把精細(xì)鑷、一把雙頭微型刮鏟、一把彈簧剪。
2.實驗耗材：準(zhǔn)備實驗所需耗材和生理鹽水(1%頭孢曲松鈉)。
3.器械消毒：術(shù)中所有使用的器械或植入物使用前需消毒處理，可以用75%乙醇消毒，有條件的可以定期高壓滅菌。
4.手術(shù)臺消毒：手術(shù)臺使用前應(yīng)用75%乙醇擦拭消毒，手術(shù)臺應(yīng)墊無菌布、干凈的吸收墊或毛巾，每次手術(shù)結(jié)束后須更換這些材料。
PART.02麻醉、固定
1.將小鼠放入麻醉劑倉室內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉，氣體流量與麻醉刻度根據(jù)實驗室的氣麻機設(shè)置。當(dāng)小鼠出現(xiàn)明顯呼吸減慢、四肢放松，則表明小鼠已進(jìn)入麻醉狀態(tài)。
2.將麻醉后的小鼠固定于腦立體定位儀上，并維持麻醉，在手術(shù)過程中時刻注意觀察小鼠呼吸。
PART.03脫毛
1.將紅霉素眼膏均勻涂抹于小鼠眼部，用量應(yīng)完全覆蓋小鼠眼部，使眼部不暴露在外。
2.使用醫(yī)用棉簽蘸取脫毛膏，逆著毛發(fā)生長的方向均勻涂抹于毛發(fā)根部，約2min后用棉簽擦拭脫去頭部毛發(fā)。
3.使用醫(yī)用棉簽蘸取生理鹽水，將小鼠頭部殘留的脫毛膏清洗干凈。
4.使用碘伏擦拭清潔脫完毛的皮膚。
PART.04暴露并清理顱骨
1.使用彈簧剪剪去頭皮。
2.將所暴露顱骨上的黏膜和兩處肌肉連接處多余脂肪全部剝?nèi)ァ?/div>
3.使用微型雙頭刮鏟刮除顱骨表面殘余黏膜、結(jié)締組織等。
4.持洗耳球，將顱骨表面吹至完全干燥。
PART.05開顱
1.以病毒注射孔或定位位點為圓心，持精細(xì)鑷將合適規(guī)格的圓形玻片放置在顱骨表面。
2.將顱骨鉆速度調(diào)至低檔，沿玻片大小打磨一圈后，使用洗耳球輕輕吹去碎屑，重復(fù)此操作直至打磨范圍完全符合玻片大小，再調(diào)整轉(zhuǎn)速至中高檔，繼續(xù)打磨。
3.待打磨顱骨出現(xiàn)裂縫時，將顱骨鉆轉(zhuǎn)速調(diào)至低檔，繼續(xù)打磨，重復(fù)操作直至整個顱窗完全斷裂。
4.持精細(xì)鑷，將顱骨片慢慢的揭開。
PART.06挑碎骨屑
使用精細(xì)鑷從顱窗側(cè)面下針，輕輕將周圍碎骨片挑出，重復(fù)此操作直至顱窗周圍完全無碎片。
PART.07安裝玻片
1.使用精細(xì)鑷將清洗后的玻片夾持輕輕放置在暴露的腦組織上；用鑷子輕輕按壓玻片，使玻片緊緊貼合打磨的顱面并嵌入顱骨下方；在體式顯微鏡下查看玻片下是否有氣泡，若有氣泡，將玻片揭開后滴加生理鹽水，重復(fù)此操作直到無氣泡止。
2.使用吸潮紙尖吸去滲出到玻片外的多余的液體，使用洗耳球輕輕吹干顱骨表面，以從外向內(nèi)的順序，用小毛刷蘸取少量生物組織膠水，涂抹在邊緣皮膚、整個顱骨和顱窗邊緣。
3.等待生物組織膠水干透后，用牙科涂藥棒蘸取406膠水，涂抹范圍同上，等待406膠水干燥。
4.使用吸潮紙尖蘸取502與牙科水泥的混合物，少量多次涂抹在顱窗的邊緣，整個操作過程當(dāng)中要切忌讓膠水流至玻片中央。
PART.08安裝頭件
1.使用 502 膠水溶解混勻牙科水泥，對暴露的顱骨進(jìn)行一層薄薄的均勻的覆蓋，完全封閉暴露的顱骨，并在牙科水泥未干時安裝頭件。
2.用牙科水泥充分填補與頭件之間的縫隙或連接薄弱處，加強頭件穩(wěn)固性。
3.等待牙科水泥干透后，把小鼠放入保溫箱，等待小鼠蘇醒。
PART.09術(shù)后護(hù)理
1.為動物提供良好的生存條件，建議單籠飼養(yǎng)，并將飼料撒在籠內(nèi)，避免動物攝食或打架時摩擦碰撞頭件，導(dǎo)致視野偏移或頭件掉落。
2.術(shù)后1-7天，對動物腹腔注射頭孢曲松鈉溶液，每日1次。
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