ProtoGel  30%

丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺：37.5:1

超純穩(wěn)定的溶液

SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)的方法

1.Laemmli SDS-PAGE凝膠配方

使用下表來(lái)確定配置不同百分比凝膠需要的試劑量。如果您電泳的凝膠百分比未包括在該表中，使用下面的公式來(lái)計(jì)算ProtoGel、ProtoGel配套的緩沖液以及其他試劑的需要量。

· 注：ProtoGel Resolving Buffer的使用量總是一樣的，無(wú)論凝膠中單體的百分比是多少（每100ml凝膠灌制液中固定添加25mlProtoGel Resolving Buffer）。

配置任何體積濃度的凝膠灌制液中所需ProtoGel的量都可以由下列公式計(jì)算：

Vp =(X) (Vt)/30

這里，Vp = 30% ProtoGel的量，X = 凝膠中所需的單體的百分比，Vt = 灌制液的總量

比如：制作100ml單體10%的凝膠，計(jì)算要添加的ProtoGel的量如下所示：

Vp = (10) (100)/30 = 33.3 ml

2.添加引發(fā)劑和灌制膠

為了達(dá)到好灌制液加入1.0ml10%（W/V）的過(guò)硫酸胺輕搖混合，之后每100ml灌制液加入0.1ml的TEMED輕搖混合，將溶液傾入凝膠灌制盒中，凝膠應(yīng)該在10-20分鐘之間開(kāi)始凝固。為了避免形成不平的界面，在聚合凝固之前加入正丁醇飽和的水溶液壓平界面。在灌制濃縮膠（具體操作見(jiàn)下一節(jié)）之前，用水將丁醇沖洗掉。

3.灌注濃縮膠

使用ProtoGel Stacking Buffer配制10ml4%的濃縮膠：ProtoGel: 1.3ml，ProtoGel Stacking Buffer:  2.5ml，去離子水: 6.1ml。加入0.05ml10％過(guò)硫酸銨和0.01ml 的TEMED，凝膠將開(kāi)始在20分鐘內(nèi)開(kāi)始凝固。

注：可以使用0.5M Tris-HCl, 0.4% SDS, pH 6.8的溶液替代ProtoGel Stacking Buffer。

4.選擇電泳緩沖液

Laemmli SDS-PAGE：對(duì)大多數(shù)SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，1X Tris-甘氨酸SDS是適合的電泳槽緩沖液。

小分子量SDS-PAGE (< 20kD)：National Diagnostics公司*的Tris-*基甘氨酸-SDS電泳緩沖液有效分離較小的蛋白質(zhì)，而無(wú)需*遵循Schagger- Von Jagow的方法。

ProtoGel使用安全提示

風(fēng)險(xiǎn)：可能致癌?？赡芤疬z傳性基因損害，此外與皮膚接觸及吞食均有毒。長(zhǎng)期吸入、與皮膚接觸或者誤吞都會(huì)對(duì)健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。

確保安全：避免直接接觸，使用前需獲取專業(yè)指導(dǎo)。如有意外發(fā)生或感覺(jué)不適，請(qǐng)立即就醫(yī)（盡可能到處粘貼此提示）。

電泳實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可與ProtoGel 30%相配套使用的產(chǎn)品及其貨號(hào)