CHO細(xì)胞在生物藥品中的廣泛應(yīng)用

根據(jù)美國FDA批準(zhǔn)上市的生物藥，包括了激素、酶、凝血因子、細(xì)胞因子、治療性抗體等數(shù)十種CHO細(xì)胞標(biāo)的藥物。

利用重組DNA技術(shù)表達(dá)生物制品，使多肽和蛋白質(zhì)可用于治療。人們對(duì)這種表達(dá)技術(shù)的主要擔(dān)憂之一，特別是在永生細(xì)胞系中，永生特性可能轉(zhuǎn)移到藥物的最終使用者身上。因此，可能誘發(fā)癌癥。世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布了指導(dǎo)文件，要求在CHO DNA的整個(gè)生產(chǎn)過程中進(jìn)行監(jiān)測(cè)，通過工藝驗(yàn)證或批次放行檢測(cè)，證明其降低到安全水平。

CHO細(xì)胞殘留與生物制品安全性

用于重組表達(dá)的 CHO（Chinese Hamster Ovary）宿主細(xì)胞殘留很可能給生物制品造成污染。若藥物研發(fā)過程不進(jìn)行檢測(cè)，則 無法評(píng)估是否充分去除污染物，則可能導(dǎo)致藥物療效降低、致癌性或引起人體免疫反應(yīng)。

• 免疫反應(yīng)：CHO細(xì)胞殘留物，可能引起人體免疫反應(yīng)，甚至引發(fā)嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。

• 致癌性：據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)，殘留DNA整合到基因組中并誘發(fā)癌癥的有一定概率。

• 療效降低：藥品中混入的生物活性物質(zhì)，可能干擾抗體藥物的效力，會(huì)降低療效。

CHO細(xì)胞殘留檢測(cè)涉及的法規(guī)

• 中國藥典2020版四部：3407 外源性DNA殘留量測(cè)定法中新增定量PCR法

• 美國藥典：1130  NUCLEIC ACID-BASED TECHNIQUES—APPROACHES FOR DETECTING TRACE NUCLEIC ACIDS (RESIDUAL DNA TESTING)

CHO細(xì)胞殘留量

生物制品中宿主CHO細(xì)胞殘留DNA既是是生產(chǎn)中帶來的雜質(zhì)，還存在一定安全隱患。因此，WHO和各國藥物注冊(cè)監(jiān)管機(jī)構(gòu)一般只允許生物制品中存在100pg/劑量以下的殘留DNA。但有時(shí)根據(jù)雜質(zhì)來源和工藝，特殊情況下最高允許10pg/劑量。

如何檢測(cè)CHO殘留DNA

人們可以通過兩種方式解決生物制藥過程中的殘留DNA問題：（1）通過過程驗(yàn)證中的清除驗(yàn)證；（2）通過常規(guī)測(cè)試藥物物質(zhì)來監(jiān)測(cè)殘留DNA水平。

無論是否通過常規(guī)藥物產(chǎn)品測(cè)試來確定殘留DNA含量，還是通過過程驗(yàn)證來證明CHO殘留DNA被清除，都需要量化殘留DNA的分析程序。用于確定生物藥殘留DNA含量的分析程序可以包括雜交、基于DNA結(jié)合蛋白的儀器、定量PCR（q-PCR）或其他DNA擴(kuò)增方法。

期望用于量化生物制藥中殘留DNA的分析程序的檢測(cè)限接近每劑10pg。基于雜交、DNA結(jié)合蛋白和q-PCR的檢測(cè)通常是技術(shù)，因?yàn)樗鼈兛梢詽M足靈敏度要求。

翼和CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理

Biowing® CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中 CHO 宿主細(xì)胞殘留 DNA。采用一套引物探針在FAM通道定量檢測(cè)樣品中 CHO 殘留 DNA，另一套引物探針在HEX通道檢測(cè)內(nèi)參DNA。