厭氧培養(yǎng)箱的使用需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行，以確保箱內(nèi)維持穩(wěn)定、可靠的無氧環(huán)境，保障厭氧微生物的正常培養(yǎng)。以下是系統(tǒng)化的操作步驟與關(guān)鍵注意事項(xiàng)：

一、操作前準(zhǔn)備

環(huán)境檢查?

確保設(shè)備放置平穩(wěn)，周圍通風(fēng)良好，避免強(qiáng)電磁干擾。檢查電源連接正常，氣源（氮?dú)?、氫氣、二氧化碳混合氣）壓力充足（通?！?MPa），氣體純度≥99.99%。

耗材與配件準(zhǔn)備?

準(zhǔn)備鈀粒（約1000g）和干燥劑（約500g）用于除氧與控濕

放入美蘭或刃天青等厭氧指示劑監(jiān)測氧氣殘留

檢查手套密封性，準(zhǔn)備好無菌培養(yǎng)皿、預(yù)還原培養(yǎng)基等實(shí)驗(yàn)器具

氣密性檢測?

關(guān)閉所有艙門，啟動(dòng)真空泵抽至0.08 MPa，關(guān)閉閥門后觀察5分鐘，壓力變化應(yīng)≤0.01 MPa，否則需用肥皂水排查漏點(diǎn)。

二、厭氧環(huán)境建立流程

氮?dú)庵脫Q（3次循環(huán)）?

充入氮?dú)馐共僮魇沂痔坠钠?，隨后抽真空至66 kPa以上

重復(fù)該過程3次，逐步降低氧氣濃度

混合氣體置換（2–3次）?

切換至混合氣體（N? 85%、H? 10%、CO? 5%）

以每分鐘10 ml左右的流量通入，配合抽真空完成2–3次循環(huán)

最后一次置換使用混合氣，確保取樣室無氧殘留

催化除氧?

打開鈀粒除氧劑電源，利用鈀催化劑將殘余氧氣與氫氣反應(yīng)生成水，實(shí)現(xiàn)深度除氧。1小時(shí)后觀察美蘭指示劑，若不變色（無氧狀態(tài)）則達(dá)標(biāo)。

紫外線滅菌?

關(guān)閉操作室，開啟紫外燈照射30分鐘，對(duì)內(nèi)腔進(jìn)行滅菌處理。

三、樣品轉(zhuǎn)移與培養(yǎng)

樣品傳入操作室?

打開取樣室外門，放入菌種后關(guān)閉

對(duì)取樣室執(zhí)行3次“抽真空→充氮?dú)?置換，最后一次充入混合氣體

檢查壓力平衡后打開內(nèi)門，將樣品移入主操作室

設(shè)置培養(yǎng)參數(shù)?

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)定溫度（通常為35–37℃）和濕度（建議45%–60%）

溫度可任意調(diào)節(jié)并保持恒定

日常監(jiān)控?

每日觀察美蘭指示劑顏色，異常時(shí)需重新置換氣體

長期運(yùn)行需持續(xù)補(bǔ)入微量混合氣體（約10 ml/min），抵消微量氧滲透

四、使用后處理與維護(hù)

清潔消毒?

使用75%乙醇或?qū)Ｓ孟緞┎潦脙?nèi)壁、手套袖套及傳遞艙，防止污染。

耗材更換?

每連續(xù)運(yùn)行一天更換一次鈀粒與干燥劑

鈀催化劑每3–6個(gè)月再生或更換（160℃烘烤2小時(shí)可活化）

氣體與電源管理?

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后關(guān)閉氣瓶閥門，排空管路余氣；長期不用時(shí)每周開機(jī)一次維持干燥。