實驗動物作為重要的研究載體，實驗動物的質(zhì)量直接關(guān)乎實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，目前使用的實驗動物中，大鼠和小鼠占有非常高的比重，需要靈敏、快速、特異性高、性價比高的檢測方案，來實現(xiàn)實驗動物病原微生物的檢測和篩查。

2023年7月開始實施的國標(biāo)GB14922—2022《實驗動物 微生物、寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》文件中對SPF大鼠小鼠需要排除的病毒、病原菌的項目做了明確要求。GB14922—2022指出，按 GB/T 14926（所有部分）和GB/T 18448（所有部分）的規(guī)定對項目的所有指標(biāo)要求逐項進行檢測。GB/T 14926 是推薦性國標(biāo)，主要是涉及病毒、病原菌的檢測方法，包括培養(yǎng)法和血清學(xué)檢測如酶聯(lián)免疫實驗、免疫熒光實驗、免疫酶實驗、血凝試驗等。GB/T 18448也是推薦性國標(biāo)，主要是涉及寄生蟲的檢測方法，如鏡檢等。這些檢測方法標(biāo)準(zhǔn)大多是20年前的標(biāo)準(zhǔn)，近幾年新興起的核酸PCR檢測方法則靈敏度更高、特異性更強、檢測更高效。

實驗動物病原微生物檢測近期已發(fā)布的團體標(biāo)準(zhǔn)

中國實驗動物學(xué)會（CALAS）在2017年發(fā)布了二十多個團體標(biāo)準(zhǔn)，例如：

T/CALAS 49—2017 《實驗動物 仙臺病毒PCR檢測方法》，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了仙臺病毒普通 RT-PCR 和實時熒光 RT-PCR 檢測方法，適用于實驗動物懷疑本病發(fā)生，實驗動物接種物、實驗動物環(huán)境和動物源性生物制品中仙臺病毒的檢測。

T/CALAS 50—2017《實驗動物 呼腸孤病毒III型PCR檢測方法》，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了呼腸孤病毒III型普通 RT-PCR 和實時熒光 RT-PCR 檢測方法。標(biāo)準(zhǔn)適用于實驗動物懷疑本病發(fā)生，實驗動物接種物、實驗動物環(huán)境和動物源性生物制品中呼腸孤病毒III型核酸檢測。

2025 年 7 月中國獸醫(yī)協(xié)會（CVMA ）發(fā)布和實施了三項團體標(biāo)準(zhǔn)：

T/CVMA 272—2025 《實驗動物 鞭毛蟲PCR檢測方法》，文件描述了實驗動物鞭毛蟲的PCR檢測方法，適用于實驗小鼠、大鼠的鞭毛蟲定性檢測。

T/CVMA 273—2025 《實驗動物 蟯蟲PCR檢測方法》，文件描述了實驗動物蟯蟲的PCR檢測方法，適用于實驗大鼠、小鼠的蟯蟲定性檢測。

T/CVMA 274—2025 《實驗動物 鼠棒狀桿菌熒光PCR檢測方法》，文件規(guī)定了實驗動物鼠棒狀桿菌的熒光PCR檢測方法，適用于實驗大鼠、小鼠的鼠棒狀桿菌定性檢測。

以上這些團體標(biāo)準(zhǔn)中，都將核酸分子檢測手段如普通PCR和熒光定量PCR作為實驗動物的病原微生物的檢測方法，說明核酸分子PCR檢測是實驗動物病原微生物檢測的有效手段。

實驗動物病原微生物qPCR的檢測方法

核酸分子PCR檢測提升了檢測效率和靈敏度，是實驗動物病原微生物檢測的有效手段，開發(fā)了多款檢測試劑盒。翼和生物結(jié)合市場需求，采用多重?zé)晒舛?/span>qPCR檢測方案，設(shè)計特異性的病原體檢測引物，開發(fā)了多款針對SPF大鼠小鼠的病毒和病原菌檢測試劑盒，檢測的病原項目符合國標(biāo)GB14922—2022《實驗動物 微生物、寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》中的病毒和細菌、真菌的檢測項目要求。

首先針對特定核酸區(qū)段，設(shè)計特異性的病原體檢測引物，確保每一款試劑盒都能精準(zhǔn)識別目標(biāo)病原體，有效避免非特異性擴增帶來的假陽性。qPCR檢測試劑盒內(nèi)包含陽性對照，可通過觀察陽性對照的擴增曲線，判斷qPCR過程是否正常。同時核酸提取過程中引入外源核酸基因組（內(nèi)參），參與提取過程，提取好的樣本核酸在熒光定量qPCR檢測過程中通過CY5通道進行外源基因組（內(nèi)參）的檢測，可有效質(zhì)控核酸提取過程，避免因核酸提取失敗導(dǎo)致的假陰性。

翼和生物SPF大鼠小鼠多重?zé)晒?/span>qPCR檢測試劑盒的優(yōu)勢除了熒光定量qPCR試劑盒固有的高效、快捷、靈敏度高等優(yōu)勢外，而且所有試劑盒的PCR循環(huán)程序通用，無需區(qū)分病毒和病原菌。多種樣本類型提取核酸時只有前處理裂解過程略有差異，其他提取操作步驟一致，方便批量處理。