1. CHO細(xì)胞

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO，Chinese hamster ovary cells），是1957 年研究者Theodore T. Puck 從中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢組織中分離出原始的 CHO 細(xì)胞系，是一種實(shí)驗(yàn)室常見的貼壁細(xì)胞系。隨后，衍生出多種具有不同屬性的細(xì)胞系，常見的有 CHO-K1、CHO-DG44 和 CHO-DXB11 等。CHO-K1，即野生型 CHO 細(xì)胞；CHO-DXB11，敲除 CHO-K1 單 DHFR(二氫葉酸還原酶) 等位基因；CHO-DG44，兩個(gè) DHFR 等位基因都被敲除。

2. CHO細(xì)胞應(yīng)用

CHO 細(xì)胞通常呈上皮細(xì)胞樣或成纖維細(xì)胞樣，具有貼壁生長(zhǎng)的特性，但經(jīng)過適應(yīng)后也可進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。CHO 細(xì)胞缺乏脯氨酸合成基因，培養(yǎng)基中需添加 L - 脯氨酸以支持其生長(zhǎng)。

CHO細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：

1、CHO細(xì)胞遺傳背景清晰；

2、CHO細(xì)胞可以適應(yīng)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)；

3、CHO細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白質(zhì)能夠獲得類似于人源蛋白質(zhì)的翻譯后修飾；

4、已經(jīng)開發(fā)出了多種商業(yè)化高效高表達(dá)系統(tǒng)。

CHO細(xì)胞的應(yīng)用：

大多數(shù)批準(zhǔn)的單抗藥來(lái)源于 CHO 細(xì)胞，可應(yīng)用于各種適應(yīng)癥。

另外CHO細(xì)胞系不會(huì)合成脯氨酸及表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR），所以CHO細(xì)胞成為研究各種EGFR突變的理想選擇。

3. CHO細(xì)胞殘留DNA

CHO細(xì)胞殘留DNA是指利用CHO細(xì)胞進(jìn)行生物制藥（如生產(chǎn)單克隆抗體、重組蛋白藥物等）過程中，最終藥物產(chǎn)品中殘留的來(lái)源于CHO細(xì)胞的基因組DNA片段。

作為生物制藥產(chǎn)品中的關(guān)鍵雜質(zhì)，CHO細(xì)胞殘留DNA其存在可能帶來(lái)潛在安全風(fēng)險(xiǎn)，因此是藥物質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一，需嚴(yán)格遵循藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)與控制。殘留DNA的產(chǎn)生原因是多樣的。細(xì)胞破裂釋放、純化工藝殘留等。

DNA片段化殘留可能引起癌變，免疫反應(yīng)等，所以藥物生產(chǎn)過程中需要嚴(yán)格控制其含量。

4. CHO細(xì)胞殘留DNA的檢測(cè)方法

DNA片段化殘留有多種檢測(cè)方法，各國(guó)的藥典都有比較明確的規(guī)定。中國(guó)藥典中規(guī)定的檢測(cè)方法有DNA探針雜交法、熒光染色法、定量PCR法。

雜交發(fā)：將特異性單鏈DNA探針標(biāo)記后，與吸附在固相膜上的供試品單鏈DNA雜交，讀取雜交結(jié)果，與已知含量的陽(yáng)性DNA對(duì)照比對(duì)后，可測(cè)定外源性DNA殘留量。

熒光染色法：雙鏈DNA熒光染料DNA特異結(jié)合形成復(fù)合物，在一定的DNA濃度范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度與DNA濃度成正比，可計(jì)算DNA殘留量。

定量PCR法：PCR反應(yīng)過程中可通過熒光標(biāo)記的探針或熒光染料摻入雙鏈，通過檢測(cè)熒光數(shù)值的變化，從而檢測(cè)PCR產(chǎn)物量。熒光強(qiáng)度達(dá)到一定閾值的Ct值與該體系所含的起始DNA模板量的對(duì)數(shù)值呈線性關(guān)系。根據(jù)已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線，可測(cè)定外源DNA殘留量。翼和開發(fā)了CHO細(xì)胞殘留DNA的檢測(cè)試劑盒。Biowing® CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中 CHO 宿主細(xì)胞 DNA。采用一套引物探針在FAM通道定量檢測(cè)樣品中 CHO 殘留 DNA，另外一套引物探針在HEX通道檢測(cè)內(nèi)參DNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn)：靈敏：檢測(cè)限可低至1 fg/μL。簡(jiǎn)單：標(biāo)曲定量參考品預(yù)分裝并凍干，繪制標(biāo)曲簡(jiǎn)單?？煽浚涸噭┖信涮子蠧HO DNA 定量參考品，已溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品；抽提加入內(nèi)參核酸，全過程質(zhì)量控制。準(zhǔn)確：樣品加標(biāo)回收，評(píng)估 DNA 提取的效率、回收率和準(zhǔn)確度，評(píng)估驗(yàn)證分析方法和系統(tǒng)性能，進(jìn)一步保證結(jié)果的準(zhǔn)確性?？旖荩翰僮鲿r(shí)間短，3 h 內(nèi)出結(jié)果。